WB實驗是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將混合蛋白質樣品分離後，利用特殊虹吸或電場裝置印跡至固相介質（例如PVDF膜）上，再以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原。
與相對應的第壹抗體特異性結合，之後再與酶或同位素標記的第二抗體相結合，最終通過底物顯色或放射自顯影來檢測特異性目的基因表達的蛋白成分。
wb實驗原理及流程圖如下所示：
蛋白質樣品制備：
原始樣品可為細胞、組織、培養上清、免疫沈澱或親和純化的蛋白，以下為定性檢測目的蛋白時細胞樣品的處理方法，其余的樣品制備方法參閱相關文獻。
註意事項：
1、將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合；1min後，將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸；1min後，將膜移至另壹保鮮膜上，去盡殘液，包好，放入X-光片夾中。
2、在暗室中，將1×顯影液和定影液分別倒入塑料盤中；在紅燈下取出X－光片，用切紙刀剪裁適當大小（比膜的長和寬均需大1cm）。
打開X-光片夾，把X－光片放在膜上，壹旦放上，便不能移動，關上X-光片夾，開始計時；根據信號的強弱適當調整曝光時間，壹般為1min或5min，也可選擇不同時間多次壓片，以達最佳效果；曝光完成後，打開X-光片夾，取出X-光片，迅速浸入顯影液中顯影，待出現明顯條帶後，即刻終止顯影。
顯影時間壹般為1～2min（20～25℃），溫度過低時（低於16℃）需適當延長顯影時間；顯影結束後，馬上把X-光片浸入定影液中，定影時間壹般為5～10min，以膠片透明為止；用自來水沖去殘留的定影液後，室溫下晾幹。