western blot實驗操作步驟如下：
1.?準備樣品
1）制冰，準備冰盒。
2）配制細胞裂解液：根據細胞數量確定所需裂解液：50ul/六孔板壹孔 。
裂解液配方：100ul碧雲天裂解液+1ul蛋白酶抑制劑混合物+1ul PMSF
3）按實驗需要準備好細胞：去掉培養基，1×PBS洗3次（去掉培養基中的血清），每個孔（6孔板）加入適量的裂解液。迅速用細胞刮刮下細胞並轉移至1.5ml管中，置於冰上20min，振蕩混合後，再置冰上10min。
2.?SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝膠電泳：制備分離膠（5ml/gel）
3.?膜轉移
1) 切膠，按Marker指示和目的條帶的位置切膠(註意將膠切角做記號)，將洗脫的膠浸入轉膜緩沖液中15分鐘。
2) PVDF膜做好記號後先浸入甲醇中1分鐘，再連同4張3mm濾紙和海綿浸入轉移緩沖液中15分鐘。