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三點校正紫外光光度法測定維生素a

三點校正紫外光光度法測定維生素a直接滴定法適用於純度高的維生素A醋酸酯的測定,測定形式是維生素A醋酸酯,所用的溶劑是環己烷,分別在300nm、316nm、328nm、340nm和360nm五個波長處測定吸光度,校正公式為A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340);皂化法適用於維生素A醋酸酯中雜質含量較多,不能直接測定,需要進行皂化水解成維生素A醇,所用的溶劑為異丙醇,分別在300nm、310nm、325nm、334nm波長處測定吸光度,校正公式為A325(正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334。

三點校正法又叫做紫外可見分光光度法,是根據被測量物質分子對紫外-可見波段範圍(150~800納米)單色輻射的吸收或反射強度來進行物質的定性、定量或結構分析的壹種方法。

描述物質分子對輻射吸收的程度隨波長而變的函數關系曲線,稱為吸收光譜或吸收曲線。紫外-可見吸收光譜通常由壹個或幾個寬吸收譜帶組成。最大吸收波長(λmax)表示物質對輻射的特征吸收或選擇吸收,它與分子中外層電子或價電子的結構(或成鍵、非鍵和反鍵電子)有關。朗伯-比爾定律是分光光度法和比色法的基礎。這個定律表示:當壹束具有I0強度的單色輻射照射到吸收層厚度為b,濃度為c的吸光物質時,輻射能的吸收依賴於該物質的濃度與吸收層的厚度。其數學表達式為: 式中的A叫做吸光度;I0為入射輻射強度;I為透過吸收層的輻射強度;(I/I0)稱紫藤為透射率T;ε是壹個常數,叫做摩爾吸光系數,ε值愈大,分光光度法測定的靈敏度愈高。