Bradford法,或考馬斯亮藍法,是壹種簡便快捷的蛋白質含量測定法,其原理基於蛋白質與考馬斯亮藍結合後顏色的變化,光吸收值與蛋白質濃度成正比。在2分鐘內,蛋白質與試劑迅速形成穩定的結合物,尤其在室溫下,其穩定性極高。然而,這種方法並非無懈可擊,存在壹些不利因素影響測定結果。
首先,特定蛋白質的結構可能導致反應效果不壹致。例如,小分子堿性多肽如核糖核酸酶或溶菌酶可能不適合此法,去汙劑如TritonX-100、SDS、NP-40濃度超過0.2%時會對結果產生幹擾。此外,蛋白質中精氨酸和芳香族氨基酸含量的差異,使得不同蛋白質在使用考馬斯亮藍法時,測定結果可能存在較大偏差。為減小這種偏差,通常會選擇g-球蛋白作為標準蛋白質來制作標準曲線。
總的來說,雖然考馬斯亮藍法具有靈敏度高和操作簡便的優點,但在實際應用時需要特別註意上述的不利因素,以確保測量結果的準確性和壹致性。