什麽是Westernblot法及Westernblot法應用

什麽是Westernblot法：Westernblot法是壹種將電泳與KIJSA結合起來的技術，可分為電泳、轉印、酶免疫測定3個階段。Westernblot法結合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性，是壹種能用於分析樣本組分的免疫學測定方法。 Westernblot法應用：Westernblot法應用分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的壹種實驗方法，並且是壹種能對蛋白進行定性和半定量的分析方法。是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，並且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。 蛋白質分析中應用的Western雜交法與DNA分析應用的Southern雜交法相似，均是把電流分離的組分從凝膠轉移至壹種固相支持體，並均以針對特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern雜交法)序列所制備的特異性樣品作為探針檢測其相同或相似序列。 對於蛋白質來說，通常使用的探針是抗體，它與附著於固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。Westernblot法的主要優點在於，它能夠從生物組織的粗提物或部分純化的粗提物中檢測和識別幾種特異的蛋白質。將聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE)分離的蛋白質從聚丙烯酰胺凝膠上通過電轉移到壹張合適的印跡膜上，隨後用和靈敏檢測系統相偶聯的抗體來識別結合在膜上的壹種或幾種蛋白質。這壹技術的靈敏度能達到標準的固相放射免疫分析的水平而又無需俊免疫沈澱法那樣必須對靶蛋白進行放射性標記。因此要對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特定蛋白進行鑒別和定量時，Westernblot法極為有用。此外，由於蛋白質的電泳分離幾乎總在變性條件下進行，因此溶解、聚集以及靶蛋白與外來蛋白的***沈澱等諸多問題全都無需加以考慮。 伯樂生命bio-rad Trans-Blot 轉印槽是壹種多功能儀器，適用於多種Westernblot法應用。多組參數靈活可設，可調節的電壓設置（從30V的過夜轉印到到 200 V的1 小時快速實驗）。電極間距設置為8cm可用於標準轉印，設置為4cm用於高強度轉印。采用特級冷卻芯和水循環冷卻裝置來調節溫度－是天然酶（4°C）或高強度轉印的理想選擇，隨著轉印時間增加（多達24小時），不會引起緩沖液耗竭。