1915年,袁世凱稱帝,蔡鍔在雲南成立護國軍,號召反袁,陜西積極響應,宣告獨立,井勿幕遂赴雲南參加護國之役,曾任川、滇護國聯軍總司令熊克武部的參謀長。袁世凱死後,井勿幕輾轉返回陜西,繼續從事革命工作。1918年11月,被推為陜西靖國軍總指揮(於右任為總司令)。11月21日,為說服郭堅、李棟才整肅軍紀,井勿幕親赴興平南仁村,準備進壹步與他們商討攻打興平、進取西安的計劃,不料反中奸計,遭郭堅殺害。
在《吊井勿幕》壹詩中,於右任寫道:
十日方歸先軫元,
英雄遺憾復何言!
渡河有恨收群賊,
殉國無名哭九原。
秋興詩存難和韻,
南仁村遠莫招魂。
還期破敵收功日,
特起丘山擬宋園。
於右任在詩中所提到的“秋興詩存難和韻”句中的“秋興”,是指1918年井勿幕居長安時步杜少陵“秋興”韻所作《秋感八首》。當時井勿幕將這八首詩寫在箋紙上贈給於右任。井勿幕犧牲後,於右任將其裝裱成軸,題詩其上,當時不少名流(如李元鼎等)皆有題詠,可惜此軸已不知下落。