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bca法測蛋白濃度原理

BCA蛋白濃度檢測是壹個實驗,是根據吸光值可以推算出蛋白濃度.堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+, Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物,兩分子BCA螯合壹個Cu+。將該水溶性復合物在562nm處的吸收值,與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。

常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

簡介

二價銅離子在堿性的條件下,可以被蛋白質還原成壹價銅離子,壹價銅離子和獨特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合壹個銅離子,形成紫色的反應復合物。該水溶性的復合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關系,因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。

實驗試劑

(1) BCA試劑的配制

① 試劑A,1L:分別稱取10g BCA (1%),20g Na2CO3·H2O(2%),1.6g Na2C4H4O6·2H2O(0.16%),4g NaOH (0.4%) ,9.5g NaHCO3(0.95%) ,加水至1L,用NaOH或固體NaHCO3調節pH值至11.25。

②試劑B,50ml:取2g CuSO4·5H2O (4%),加蒸餾水至50ml。

③BCA試劑:取50份試劑A與1份試劑B混合均勻。此試劑可穩定壹周。

(2)標準蛋白質溶液:稱取0.5g牛血清白蛋白,溶於蒸餾水中並定容至100ml,制成5mg/ml的溶液。用時稀釋十倍。