blot 電泳轉移液中甲醇和SDS各有什麽作用

SDS是陰離子活性劑，聚丙烯凝膠電泳中加入SDS可以使蛋白質變性，肽鏈伸展，SDS與蛋白質結合，使其都帶有負電。每克蛋白質大約可結合1.4gSDS。這些電荷量遠遠大於蛋白質分子原來所帶的電荷，因而掩蓋了不同蛋白質間的電荷差異，分子量越大攜帶電荷越多。又因為是在聚丙烯凝膠中電泳，由於分子篩效應，肽鏈越長，遷移速率越慢。在壹定分子量範圍內（15KD~200KD）蛋白質分子量的對數與蛋白質多肽鏈的遷移率之間有線性關系。因此可以根據遷移率求出對應的分子量大小。

網上說甲醇可以激活PVDF使其帶陽離子以便於和帶陰離子的SDS蛋白質結合物相結合，但是PVDF的化學式中找不到可以攜帶陽離子的地方。而且不明白為什麽親潤甲醇就可以使其攜帶陽離子。。後來我的老師告訴我網上說的不對。。甲醇在激活PVDF膜和transfer buffer中的用途是不壹樣的。PVDF由於疏水性並不能和蛋白質結合，而甲醇可以賦予其親水性。而在transfer buffer中，甲醇是用來remove SDS的。因為在電場中，尤其是小分子蛋白，與SDS結合很容易穿過膜而不能和膜結合。因此需要甲醇來remove SDS。使蛋白和膜更好的結合。