4×100米接力賽的規則包括起跑、比賽過程、要求、場地與設施等方面，介紹如下：
1、起跑
400米及400米以下（包括4×100米和4×400米接力的第壹棒）各徑賽項目的起跑必須使用起跑器，其他徑賽項目的起跑采用站立姿勢。起跑器連接著起跑監視器，以幫助發令員確認起跑是否犯規以及對起跑犯規負有責任的運動員。
2、比賽過程
接力賽中，運動員必須在30米的接力區內後20米裏完成交接棒。“接力區內”的判定是根據接力棒的位置，而不是根據參賽者的身體或四肢的位置。在4×100米接力跑中，第壹棒全程及第二棒的第壹彎道是分道跑，第二棒運動員要跑至搶道線後方可自由搶道。
第壹棒的傳接必須在參賽者指定的跑道內進行，其余各棒的傳接，裁判員根據第二及第三棒運動員通過200米起點處的先後，按次序讓其第三及第四棒的隊友在接力區內，由內至外排列等候接棒。
3、要求
4×100米接力跑是分道進行，接棒者可以在接棒區前10米內起跑，接力棒必須拿在手上，直到比賽結束為止。任何人掉了棒，必須由其本人拾回，而且要在不影響別人的情況下，方可越出自己的跑道以拾回接力棒。所有接力賽事，必須在接棒區內完成交接棒。
“接棒區內”的判定是根據接力棒的位置，而不是根據參賽者的身體或四肢的位置。任何參賽者在傳接棒完畢後故意越出跑道以妨礙其他參賽隊伍，其隊伍可以被取消資格。
4、場地與設施
比賽場地為標準400米場地，內突沿外沿半徑為36.5米。每條跑道寬1.22米（包含右側分道線），分道線寬5厘米。跑進的方向為左手靠內場。分道編號應以左手最內側分道為第1分道。即賽跑按逆時針方向進行，環形跑道從內向外依次是第1至第9號跑道。
現場觀看4×100米接力賽的註意事項
1、觀摩比賽應提前入座，這樣，既尊重運動員，也不影響他人觀看比賽。
2、運動員出場時，觀眾應該給予鼓勵和掌聲，不只給予本國的和自己喜歡的運動員，還應包括其他的運動員。
3、當運動員開始跳躍、投擲項目助跑時，觀眾可以根據運動員的助跑節奏鼓掌，註意不要在看臺上隨意走動。
4、比賽結束時，獲勝運動員為答謝觀眾壹般還會繞場壹周，大家壹定要用掌聲和歡呼聲為其精彩表現表示欣賞和鼓勵。
5、把賽場當作自己的家去愛護，賽場內禁止吸煙，手機要關機或設置在振動、靜音狀態。