pcr擴增所用的試劑:
pcr擴增步驟:
1.細菌染色體DNA的提取(見上壹組)?
2.RAPD反應體系的配置(上圖)
3·反應程序:將RAPD反應試劑加入EP管中 輕混後用100ul石蠟油覆蓋於反應混合液之上,防止樣品在反復加熱-冷卻的過程中蒸發,蓋好蓋子。
打開PCR反應儀輸入以下反應數據?
· ?94 攝氏度預變性5min?
· ?94攝氏度變性40s?
· ?40攝氏度退火40s?
·? 72攝氏度延伸1min?
將EP管放入儀器開始擴增,循環35次;72攝氏度延伸10min
註意事項:
1、PCR反應體系中DNA樣品及各種試劑的用量都極少,必須嚴格註意吸樣量的準確性及全部放入反應體系中。?
2、為避免汙染凡是用在PCR反應中的Tip尖、離心管、蒸餾水都要滅菌;吸每種試劑時都要換新的滅菌Tip尖。?
3、加試劑時先加消毒三蒸水,最後加DNA模板和Taq?DNA聚合酶。?
4、置PCR儀進行PCR反應前,PCR管要蓋緊,否則使液體蒸發影響PCR反應。?
5、引物條件首先引物與模板的序列要緊密互補,其次引物與引物之間避免形成穩定二聚體或發夾結構,再次引物不能在模板的非目的位點引發DNA聚合反應(即錯配)。