cck8實驗原理如下:
壹、細胞活力檢測試劑盒(CCK-8)可用於簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。
二、其基本原理為:該試劑中含有WST-8,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。
三、在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan dye)。
四、生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這壹特性直接進行細胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用於測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的壹種高靈敏度,無放射性的比色檢測法,可替代傳統的MTT法。
知識拓展
CCK-8是壹種廣泛應用於細胞增殖和細胞毒性的細胞生物學實驗。CCK-8 溶液可以直接加入到細胞樣品中,不需要預配各種成分。細胞增殖越多越快,細胞顏色越深,證明毒性小;細胞毒性越大,則顏色越淺。對於同樣的細胞,顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細胞數,目呈線性關系。
實驗步驟
1.取生長狀態良好的細胞制備成壹定濃度的細胞懸液,每孔100ul加入96孔細胞培養板中。通常細胞增殖實驗每孔加入2×103個/100ul 細胞,細胞毒性實驗每孔加入5×103個細胞/100ul (具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。
如果是貼壁細胞,需要37℃培養箱進行預培養2-6小時等細胞貼壁後再開展實驗,如果是懸浮細胞,不需要預培養。
2. 根據實驗需求,在培養孔中加入0-10ul待測樣本繼續培養適當時間。如果是做細胞毒性試驗,加入毒性物質後的培養時間需要摸索。要看毒性物質的性質和細胞的敏感性,壹般要根據細胞周期來決定,起碼要1-2代以上的時間。
3. 取10ul CCK-8溶液加入96孔細胞培養板,在37℃培養箱中繼續孵育0.5-4小時。
4. 測定吸光度。建議采用雙波長進行測定,檢測波長430-490nm,參比波長600-650nm,或者采用450nm單波長檢測。