BCA 法原理
堿性條件下,蛋白將 Cu2+還原為 Cu+,Cu+與 BCA 試劑相互作用形成紫色的絡合物,該水溶性的復合物在 562nm 處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關系,因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
實驗操作具體步驟
1. 梯度稀釋牛血清白蛋白(BSA)標準品(具體操作按試劑盒中說明操作)
2. 制備 BCA 工作液(具體操作按說明書進行)
3. 將各個稀釋濃度的蛋白質標準品和待測蛋白質樣品加入到微孔板或試管中,分別加入 BCA 工作液(比例參照試劑盒說明書)混勻。
4. 密封後,37℃ 保溫 30-60 min
5. 冷卻到室溫,以空白為對照,測量樣品在 562nm 或該波長附近的吸光值
6. 將各個標準品和待測蛋白質樣品在 562nm 處的吸光值減去空白標準品在 562nm 處的平均吸光值。