1、細胞培養:需要培養足夠的細胞以供實驗使用。將細胞株接種到含有適當培養基的細胞培養瓶中,然後在適當的條件下(如37℃、5%CO2)進行培養,直至細胞長至所需的密度。
2、細胞收集:將培養好的細胞進行收集。可以通過離心(如1000rpm,5分鐘)來收集細胞。然後,輕輕倒掉上清液,留下細胞沈澱。
3、細胞裂解:為了提取細胞內的激酶,需要將細胞進行裂解。可以將細胞沈澱重懸於適量的裂解緩沖液中,然後置於冰上孵育30分鐘。
4、離心:裂解後,將細胞裂解液進行離心(如12000rpm,15分鐘,4℃)。離心後,上清液中含有細胞內的激酶和其它蛋白質。
5、提取細胞樣品:將上清液轉移到壹個新的離心管中,即可用作體外激酶抑制實驗的細胞樣品。