不可以
根據2018年交通部發布《道路旅客運輸企業安全管理規範》第38條規定：長途客運車輛淩晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸；從事線路固定的機場、高鐵快線以及短途駁載且單程運營裏程在100公裏以內的客運車輛，在確保安全的前提下，不受淩晨2時至5時通行限制。
如果乘坐的大巴車裏程超過100公裏，且安排的固定線路包含高速公路，在淩晨2時至5是不可以行使的。
根據根據2018年交通部發布《道路旅客運輸企業安全管理規範》第38條規定，禁止在夜間駕駛客運車輛通行達不到安全通行條件的三級及以下山區公路，司機日間連續駕駛時間不得超過4小時，夜間連續駕駛時間不得超過2小時，每次停車休息時間應不少於20分鐘。
如果夜間長途客車連續駕駛超過2小時，運輸組織是不會組織這個時段的客運活動的。只有符合固定線路，單程運營裏程在100公裏以內的客運車輛，在確保安全的前提下（夜間長途客車連續駕駛低於2小時），不受淩晨2時至5時通行限制，是可以在高速公路行駛。
擴展資料：
《道路旅客運輸企業安全管理規範》第三十八條 客運企業在制定運輸計劃時應當嚴格遵守客運駕駛員駕駛時間和休息時間等規定：
（壹）日間連續駕駛時間不得超過4小時，夜間連續駕駛時間不得超過2小時，每次停車休息時間應不少於20分鐘；
（二）在24小時內累計駕駛時間不得超過8小時；
（三）任意連續7日內累計駕駛時間不得超過44小時，期間有效落地休息；
（四）禁止在夜間駕駛客運車輛通行達不到安全通行條件的三級及以下山區公路；
（五）長途客運車輛淩晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸；從事線路固定的機場、高鐵快線以及短途駁載且單程運營裏程在100公裏以內的客運車輛，在確保安全的前提下，不受淩晨2時至5時通行限制。
客運企業不得要求客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定駕駛客運車輛。企業應主動查處客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定的行為，發現客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定駕駛客運車輛時，應及時采取措施糾正。
參考資料：
中華人民***和國交通運輸部——《道路旅客運輸企業安全管理規範》