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dna提取方法

dna提取主要是CTAB方法,其它的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。

壹.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯萃取,高速離心後取上清,所得DNA大小為100-150kb。

二.甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沈澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。

四.異丙醇沈澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)。

五.表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沈澱或透析。

六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然後離心後取上清,可用於PCR反應。

七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。