北京時間12月14日晚20點，2020-21賽季歐聯杯32強抽簽儀式在瑞士尼翁的歐足聯總部進行。本次抽簽儀式的嘉賓是葡萄牙前國腳馬尼切，他在2003年隨波爾圖獲得了歐洲聯盟杯冠軍。
最終，豪門球隊中，熱刺抽中了奧地利球隊沃爾夫斯貝格，曼聯抽中了西甲領頭羊皇家 社會 ，阿森納抽中葡超豪門本菲卡，AC米蘭對陣貝爾格萊德紅星。
本賽季歐聯杯32強在上周中全部產生。和歐冠的抽簽原則壹樣，歐聯杯抽簽采取同足協回避原則和同小組回避原則，同時烏克蘭的球隊不會抽到俄羅斯的球隊。32支球隊也分成種子隊和非種子隊兩檔，種子隊對陣非種子隊。值得壹提的是，目前五大聯賽的領頭羊都在歐聯杯中，他們是熱刺、AC米蘭、勒沃庫森、皇家 社會 和裏爾。
歐聯杯32強的種子隊包括曼聯（英格蘭）、阿森納（英格蘭）、熱刺（英格蘭）、AC米蘭（意大利）、羅馬（意大利）、頓涅斯克礦工（烏克蘭）、勒沃庫森（德國）、格拉斯哥流浪者（蘇格蘭）、埃因霍溫（荷蘭）、萊斯特城（英格蘭）、那不勒斯（意大利）、比利亞雷亞爾（西班牙）、薩格勒布迪納摩（克羅地亞）、霍芬海姆（德國）、布魯日（比利時）、阿賈克斯（荷蘭）。
非種子隊有安特衛普（比利時）、本菲卡（葡萄牙）、布拉加（葡萄牙）、貝爾格萊德紅星（塞爾維亞）、基輔迪納摩（烏克蘭）、格拉納達（西班牙）、克拉斯諾達爾（俄羅斯）、裏爾（法國）、奧林匹亞科斯（希臘）、薩爾茨堡（奧地利）、布拉格斯拉維亞（捷克）、伯爾尼年輕人（瑞士）、莫爾德（挪威）、皇家 社會 （西班牙）、特拉維夫馬卡比（以色列）、沃爾夫斯貝格（奧地利）。
最終的32強抽簽對陣如下：
沃爾夫斯貝格VS熱刺
基輔迪納摩VS布魯日
皇家 社會 VS曼聯
本菲卡VS阿森納
貝爾格萊德紅星VS AC米蘭
安特衛普VS格拉斯哥流浪者
布拉格斯拉維亞VS萊斯特城
薩爾茨堡VS比利亞雷亞爾
布拉加VS羅馬
克拉斯諾達爾VS薩格勒布迪那摩
伯爾尼年輕人VS勒沃庫森
莫爾德VS霍芬海姆
格拉納達VS那不勒斯
特拉維夫馬卡比VS頓涅茨克礦工
奧林匹亞科斯VS埃因霍溫
裏爾VS阿賈克斯