fitc熒光標記原理如下:
FITC異硫氰酸熒光素是壹種常用的標記抗體的方法。FITC壹般為黃色。棕色或棕色粉末或結晶,在低溫下可保存數年。在堿性條件下,FITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基結合,形成FITC-蛋白質結合物,即熒光抗體或熒光結合物。
抗體分子可標記15~20個FITC分子。標記的抗體仍能保持與相應抗原結合的能力,在熒光源紫外線或藍紫光的刺激下產生黃綠色熒光,通過熒光顯微鏡觀察或使用流細胞儀進行分析,從而定性、定位或定量抗原。
FITC標記抗體方法
FITC抗體標記主要包括Marshall直接標記法、Chadwick間接標記法、改進標記法和透析法。
FITC抗體標記註意事項
1、溫度.時間.pH.熒光素和蛋白質量等都是影響標記效率的因素,需要控制。
2、熒光素及其標記抗體的操作過程應註意避光,攪拌速度應適當避免產生氣泡。
3、註意正確操作,使柱體均勻.柱面平整,無氣泡.裂縫。
4、上樣和洗脫應為前切和後切。前切指柱頂緩沖液與凝膠平面相切時加樣品,後切指樣品與凝膠平面相切時加洗脫緩沖液。