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bradford法測定蛋白質含量?

bradford法測定蛋白質含量,也就是考馬斯亮藍法,其原理是考馬斯亮藍在遊離狀態下呈棕紅色,最大光吸收在488nm; 當它與蛋白質結合後變為藍色,蛋白質—色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用於蛋白質的定量測定。

蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量。不利因素主要是特殊蛋白的結構,緩沖液組分中有幹擾試劑等。

擴展資料:

考馬斯亮藍法該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的,但不適用於小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去汙劑的濃度超過0.2%影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此考馬斯亮藍染色法用於不同蛋白質測定時有較大的偏差,在制作標準曲線時通常選用 g-球蛋白為標準蛋白質,以減少這方面的偏差。

百度百科-考馬斯亮藍法