SetsukoShioda等人研究發現，HUVEC細胞株18-30代的倍增時間為23.5個小時，24-27代的倍增時間為67個小時，27-30代的倍增時間為84個小時，32-34代的倍增時間為100個小時。培養至40代後，細胞形態出現多樣化，有些細胞變大或變小，有些細胞出現多核；細胞密度下降、倍增時間延長。最後細胞在第54代停止生長，ATCC的預期壽命也顯示在50-60代。
2018年，Setsuko Shioda等人發現HUVEC細胞株（passage 31）在貼壁匯合時細胞與細胞之間存在間隙，這與典型的內皮細胞特征有所不同。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4 mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm器皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
細胞凍存
凍存條件
60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
推薦海星HyCyte?壹步凍存液(即用型、無血清、無需程序降溫)
1. 待細胞生長至可傳代的密度，即可準備凍存。
2. 消化細胞，取少量細胞懸液計數。細胞懸液經250 g離心4 min。
3. 離心後去除上清，用適量4℃預冷的凍存液重懸細胞。將細胞按比例或數量分裝至凍存管中。壹般凍存密度為(1.0~2.0)×106個/mL。
註意:?細胞長時間在非培養條件下放置會嚴重影響細胞的狀態。如離心後用凍存液重懸計數，請將細胞放置於4℃冰箱內，以減弱細胞代謝，較好的保持細胞狀態。
4. 如使用海星壹步凍存液，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“壹步”凍存。如使用程序凍存液，需將凍存管放入提前預冷的程序降溫盒後放入-80℃冰箱。
5. 24小時後可將凍存管轉移到液氮進行長期保存。
?註意:?細胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h後盡快轉移至液氮中。
培養基： 內皮細胞培養基礎培養基＋5% FBS＋1%內皮細胞培養添加劑+1% P/S
推薦傳代比例： 1:3-1:4，每2-3天換液壹次
培養條件： 氣相：95%空氣+5%CO?，溫度：37℃
細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 預熱完全培養基、胰酶、PBS
2. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
3. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA 貨號: GUTP-R001）於培養瓶中，置於37℃培養箱中消化1-2分鐘，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
4. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液後吹勻。
5. 將細胞懸液按1：2到1：4的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
1. 該細胞為有限傳代細胞系，在體外培養可傳20代。請註意代次控制。
2. 該細胞培養難度較高，建議使用專用培養基。
3. 永生化的人臍靜脈內皮培養體系： 內皮細胞基礎培養基＋5% FBS＋1%內皮細胞培養添加劑+1% P/S。
推薦使用海星人臍靜脈內皮細胞完全培養基，貨號：TCH-G406。
4. 如選擇使用其它品牌培養基，可選：
（1） 內皮細胞基礎培養基推薦：ScienCell（Cat.No.1001）
基本成分介紹：永生化的人臍靜脈內皮培養體系是專門為血管內皮細胞體外培養設計的最適於其生長的完全培養基。包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質和低濃度胎牛血清(5%)。該培養基的配方能夠選擇性的促進正常血管內皮細胞體外培養中的增殖和生長，並為其達到最理想營養平衡狀態。
（2） 胎牛血清推薦：HyCyte?幹細胞預篩選胎牛血清 （Cat.No.FBP-S001）
基本成分介紹：適用於有較高要求的細胞和較難獲得的細胞，如血管內皮細胞。
（3） 內皮細胞培養添加劑推薦：ScienCell（Cat.No.SC1052)
基本成分介紹：內皮細胞培養添加劑(ECGS)是壹種從牛腦垂體提取的培養基補充劑，含有培養血管內皮細胞所必需的生長因子、激素和蛋白質。該補充劑最大限度地促進永生化的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的生長，該因子的添加對維持永生化的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）形態至關重要。
（1）請務必使用以上兩種推薦培養體系進行永生化的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的培養，否則可能導致細胞無法增殖。
（2）T25瓶細胞由於運輸過程影響細胞會分泌產生的少量小黑點，不是汙染問題，屬正常現象，使用專用培養體系進行培養後黑點會逐步減少。
（3）永生化的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）對血清的品質要求較高，請使用高品質胎牛血清進行培養。如細胞狀態欠佳，建議將胎牛血清的濃度提高到10%。