診斷支原體肺炎的依據有下列幾點。
（1）持續咳嗽，較頻繁，肺部無明顯陽性體征，X 線檢查有斑狀或大片狀陰影，X 線的病變明顯，這是本病最主要的特征。
（2）白細胞計數大多正常或稍減低。
（3）使用青黴素、鏈黴素、磺胺藥無效，但紅黴素能明顯減輕癥狀或縮短病程。
（4） 血清冷凝集滴定度增高，1 ∶ 32 以上， 陽性率為50% ～ 70%，冷凝集素多於發病後第1 周末開始出現，至3 ～ 4 周達高峰，2 ～ 4 個月才消失。細菌性（包括結核）及病毒感染都呈陰性反應，故可借此排除肺結核、細菌、病毒性肺炎。
（5）分離病原體：從患者痰、鼻、咽拭子中培養支原體，但需10 天以上，因此臨床意義不大。
（6）血清特異性抗體測定，包括熒光抗體、補體結合及血凝抑制等，均有助於確診，但不作為常規檢查內容。
藥物治療：紅黴素或四環素均有效，但因嬰幼兒及8 歲以前的兒童若服用過多四環素，可引起牙齒永久性黃棕色，乳齒及恒齒的釉質發育不良也較常見，甚至可以暫時阻礙骨骼生長以及影響肝腎功能。因此，治療本病，患者首選紅黴素，20 ～ 40mg/kg?d，分4次口服，療程達2 周，可改善臨床癥狀，減少肺部陰影，並可縮短病程。嚴重者，可靜脈點滴紅黴素，20 ～ 30mg/kg?d 加入5% 葡萄糖中，藥與糖濃度比例為1mg ∶ 1ml，滴速要慢，以免刺激局部血管引起靜脈炎。紅黴素胃腸反應明顯者，可服用助消化類藥物。