上海京劇院成立於1955年3月，由當時原有的幾個公營京劇團華東戲曲研究院華東實驗京劇團、上海市人民京劇團、新民京劇團組建而成，創院院長周信芳，壹時匯集了周信芳、蓋叫天、童芷苓、李玉茹、言慧珠、沈金波、童祥苓、黃桂秋、小王桂卿、黃正勤、王正屏、孫正陽、金素雯、趙曉嵐、王燮元、趙濟羹、張鑫海、郝德泉、查長生、黎秋覺、高明亮、王玉璞、蔣阿炳、馬錦良等京劇表演藝術家。天蟾舞臺改公營後，亦由劇院負責經營管理。
1966年文化大革命爆發以前，劇院曾參加《武松》、《宋士傑》、《周信芳舞臺藝術》、《尤三姐》等多部京劇電影的攝制，紀錄保存了周信芳、蓋叫天、童芷苓、李玉茹等京劇表演藝術家的舞臺藝術。
文革開始後，劇院排演的《智取威虎山》、《海港》兩出現代京劇（京劇現代戲）被列進第1批8個樣板戲裏面。第2批樣板戲裏的《龍江頌》和《磐石灣》也是劇院排演的。《智取威虎山》、《海港》、《龍江頌》、《磐石灣》都拍成京劇電影。