PCR引物濃度壹般選5～20μmol/L。
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即：引物(PCR引物為DNA片段，細胞內DNA復制的引物為壹段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。
引物有多種設計方法，由PCR在實驗中的目的決定，但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。
模板即擴增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個原則，第壹純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。
緩沖液的成分最為復雜，除水外壹般包括四個有效成分：緩沖體系，壹般使用HEPES或MOPS緩沖體系；壹價陽離子，壹般采用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；二價陽離子，即鎂離子。
擴展資料
PCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：
①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右壹定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：DNA模板-引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基互補配對與半保留復制原理，合成壹條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈，重復循環變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”。
而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成壹個循環需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。?
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