不能呈現雙縮脲反應的有二肽。
壹、雙縮脲反應
1、雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的,而為氨基酸所沒有的壹種顏色反應。壹般分子中含有兩個氨基甲酰基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物與堿性溶液作用,生成紫色或者藍紫色的絡合物。
2、在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H?NOC-NH-CONH?)與銅離子(Cu?)作用,形成紫紅色絡合物(該物質的分子結構式見圖),該反應即雙縮脲反應。銅溶液作用,就會形成紫色或藍紫色絡合物。
二、鑒定
1、由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量的關系在壹定範圍內符合比爾定律,而與蛋白質的氨基酸組成及分子量無關。
2、故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量(借助分光光度計可減小誤差)。雙縮脲反應主要涉及肽鍵,因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得,操作簡便,可測定的範圍為1~10mg蛋白質,適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定。
3、能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。幹擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沈澱。
三、二肽
1、由兩個氨基酸分子縮合而成的化合物叫作二肽,廣義上二肽包括鏈狀二肽和環二肽。例如丙谷二肽就是由L-丙氨酸和L-谷氨酸縮合而成的二肽。
2、肌肽是由β-丙氨酸和L-組氨酸兩種氨基酸組成的二肽。環(組氨酸-脯氨酸)二肽可由玉米蛋白水解得到,是由L-組氨酸和L-脯氨酸環合而成的環二肽。