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細胞凍存前後需要考慮哪些環節

(1)欲冷凍保存之細胞應在生長良好(logphase)且存活率高之狀態,約為80–90%致密度。細胞凍存前應保證細胞的活力好,無汙染

(2)冷凍前檢測細胞是否仍保有其特有性質,例如hybridoma應在冷凍保存前壹至二日測試是否有抗體之產生。

(3)3.壹定要保證DMSO的濃度是10%,凍細胞要舍得用進口的DMSO

(4)註意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級,無菌且無色(以0.22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品,如Sigma D-2650),以5~10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級,以高壓蒸汽滅菌後避光保存。在開啟後壹年內使用,因長期儲存後對細胞會有毒性。

(5)慢凍,快解凍。細胞在 -15 度左右胞內形成結晶對細胞損傷,緩慢降溫有助於減少損傷,故放入 -20 度冰箱中凍存可實現緩慢降溫較為方便,保存時間過久會影響細胞活力。