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黃曲黴毒素B1的檢測方法

GB2761-2014《食品安全國家標準 食品中真菌黴素的限量》中對於黃曲黴毒素B1的限量以及檢測方法做了修改,嬰幼兒配方食品及嬰幼兒輔助食品按照GB5009.24規定的方法測試,其他食品按照GB/T18979規定的方法測定。 TLC法是測定黃曲黴毒素的經典方法,是中國測定食品及飼料中AFT黃曲黴素B1(AFB1)的標準方法之壹(GB/T5009.23-2006)。其原理是針對不同的樣品,用適宜的提取溶劑將AFB1從樣品中提取出來,經溶劑萃取純化,再在薄層板上層析展開,分離,利用AFB1的熒光特性,根據熒光斑點的大小和強弱,比較測定黃曲黴毒素含量。

TLC有單項展開法和雙向展開法,TLC法由於設備簡單,易於普及,所以國內外仍在使用,但由於該法樣品前處理繁瑣,且提取和凈化效果不夠理想,提取液中雜質較多因而在展開時影響斑點的熒光強度,而雙向展開雖避免了雜質幹擾,增加了靈敏度,但增加了操作步驟和時間。 酶聯免疫法檢測AFB1的理論基礎是抗原抗體反應,其采用單克隆或多克隆抗體技術,具有特異性強、分析時間短等優點。其原理是抗原(或抗體)吸附於載體上的免疫吸附劑和用酶標抗體(或抗原)與標本中的待測物(抗原或抗體)起特異的免疫學反應,最後用測定酶活力的方法來增加測定的敏感度。大體分為2類:壹是用雙抗體夾心法檢測樣本中的AFTB1, 二是用競爭法檢測樣本中的AFTB1,。為了使用方便,目前國內外已研制了酶標記免疫吸附測定試劑盒及配套儀器,方法也被列入國家標準(GB/T5009.22 1996第二法)。

但由於ELISA法中酶的活性易受反應條件影響,因此ELISA法測定結果穩定性較差,分析結果的準確性不高,容易出現假陽性結果。 壹般來說,組織中黃曲黴毒素含量很低,而液相色譜串聯質譜法具有比高效色譜法更高的靈敏度和準確性,如今這種方法還極少使用在測定組織黴菌毒素含量中。該方法檢測限可達0.02~0.025 ppb。 84%甲醇水溶液提取樣品中,正己烷脫脂,HLB固相萃取柱凈化。采用電噴霧電離,正離子掃描,選擇多反應檢測模式(MRM)監測,外標法定量,該法靈敏,結果可靠。