Luciferase報告基因系統是以 熒光素(luciferin) 為底物來檢測 螢火蟲熒光素酶 (fireflyluciferase)活性的實驗。熒光素底物會在熒光素酶作用下會發光(波長540-600nm),且光強能反應熒光素酶的表達量。熒光素酶的蛋白表達量與啟動子活性、mRNA的穩定性及翻譯效率相關。從而將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達,再檢測其發光強度,就能判斷這些序列對蛋白表達的影響
為了減少實驗誤差,同時轉染壹個能穩定表達的 腎熒光素酶 的質粒作為內參,催化 腔腸素 氧化產生藍光(波長460-540nm);所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。
2 . 實驗流程圖
3 . 服務內容:雙熒光素酶報告檢測啟動子活性服務主要分為以下兩種:
a . ? 啟動子活性分析,用於檢測待測啟動子是否有活性及其活性區域;
b . ? 啟動子與轉錄因子結合驗證,用於研究某轉錄因子是否調控某基因的待測啟動子,以及它們的結合區域
項目 服務內容 結果交付 實驗周期 客戶提供
啟動子活性分析 合成和構建2kb啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告30工作日1、細胞
2、基因信息
構建截短啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告
啟動子與轉錄因子結合驗證 合成和構建野生型啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告30工作日[if !supportLists]1、?[endif]細胞
[if !supportLists]2、?[endif]基因及轉錄因子信息
構建突變型啟動子熒光素酶載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
構建轉錄因子表達載體載體質粒、甘油菌、測序結果和實驗報告
細胞培養和雙熒光素酶檢測檢測數據和實驗報告
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4. 送樣要求
a.重組載體:
質粒不少於2ug,或甘油菌約100ul
b.細胞:
活細胞,2個T25瓶,細胞匯合度>80%(廣州市內);或凍存細胞2管(廣州外地區)
備註:載體或細胞可由如期代為構建或購買
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5. 樣本保存和運輸要求:
a. 質粒或甘油菌可用冰袋保存運輸;
b. 活細胞常溫取樣;
c. 凍存細胞幹冰取樣/運輸:需要至少在送樣前壹天通知我方