1,紙片取出後須放室溫10min後方可打開 ,否則空氣中的水份冷凝在紙片上易潮解 ,使藥物失效影響藥敏試驗結果。
2,應用直徑90cm平皿 ,在水平的無菌臺上傾倒 ,準確量取高壓滅菌後的M2H瓊脂液25ml ,使之瓊脂板厚度為 4mm。否則厚度過高 ,使含藥物紙片的藥物半球形擴散的體積加大 ,導致假耐藥;反之導致假敏感。
3 將菌制成菌懸液用無菌棉簽蘸取菌液在管壁上擠去多余菌液 ,塗布整個M2H平板表面 ,反復 3 次 ,每次將平板旋轉60 度 ,保證塗布均勻 ,35 ℃培養後菌落呈半融合狀態 ,否則影響藥敏結果。
其他方法
E試驗（E-test）
E試驗是指濃度梯度瓊脂擴散試驗，其原理基本同擴散法，即濃度呈連續梯度的抗菌藥物從塑料試條中向瓊脂中擴散，在試條周圍抑菌濃度範圍內受試菌的生長被抑制，從而形成透明的抑菌圈。E試驗綜合了稀釋法和擴散法的原理和特點，同時還彌補了二者的壹些不足，可以像稀釋法壹樣直接定量測出抗菌藥物對受試菌的MIC。
培養基、菌液制備和接種
3.1.培養基、菌液制備和接種 同紙片擴散法。
貼E試驗條
3.2.貼E試驗條 同紙片擴散法，E試驗條的刻度面朝上，不得貼反，壹旦接觸瓊脂後不得再移動。直徑150mm的平皿內可放置6根E試驗試條，90mm者壹般只能放置1根。
孵育時間和溫度
3.3.孵育時間和溫度 同紙片擴散法。
孵育後圍繞試條可形成壹個橢圓形的抑菌圈，在抑菌圈和試條的橫切相交處試條上的讀數刻度即是測定抗菌藥物對受試菌的MIC。閱讀時應註意的問題見供應商的產品說明書
微量肉湯稀釋法
抗菌藥物和培養基制備
1.2.1.抗菌藥物和培養基制備 同常量肉湯稀釋法。
MIC板制備
1.2.2.MIC板制備 無菌操作，將倍比稀釋後不同濃度的抗菌藥物溶液分別加到滅菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加藥液，每孔10μl，第12孔不加藥作為生長對照，冰凍幹燥後密封，-20℃以下保存備用。
接種物制備
1.2.3.接種物制備 將用生長法或直接菌懸液法制備的濃度相當於0.5麥氏比濁標準的菌懸液，經MH肉湯1∶1000稀釋後，向每孔中加100μl，密封後置35℃普通空氣孵箱中，孵育16~20h判斷結果。當試驗嗜血桿菌屬，鏈球菌屬時，孵育時間為20~24h，試驗葡萄球菌和腸球菌對苯唑西林和萬古黴素的藥敏試驗時孵育時間必須滿24h。此時，第1孔至第11孔藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
結果判斷
1.2.4.結果判斷 以在小孔內完全抑制細菌生長的最低藥物濃度為MIC。當陽性對照孔（即不含抗生素）內細菌明顯生長試驗才有意義。當在微量肉湯稀釋法出現單壹的跳孔時，應記錄抑制細菌生長的最高藥物濃度。如出現多處跳孔，則不應報告結果，需重復試驗。通常對革蘭陰性桿菌而言，微量肉湯稀釋法測得的MIC與常量肉湯稀釋法測得的結果相同或低壹個稀釋度（1孔或2倍）。
不好意思 速度有些慢
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