細胞外囊泡(簡稱EV)是細胞釋放的各種具有膜結構的囊泡結構，這些囊泡的直徑可以從30和40nm到8和9um不等。細胞外囊泡有不同的亞群，外來體是目前最熱門的亞群。
但由於目前很難純化出壹個非常純的外來體子集，所以人們通常純化直徑小於200nm的囊泡，於是越來越多的人開始稱之為sEV(小細胞外囊泡)。為了嚴謹起見，今天我們也把這些膜泡稱為細胞外泡。除非本文另有說明，胞外小泡主要指外泌體和微囊。
今天主要內容包括胞外小泡的研究意義，胞外小泡的分類，胞外小泡的成分，細胞培養上清液的制備，胞外小泡的保存，胞外小泡鑒定的實驗要求。所有內容均參考目前已發表的評論，非張發明。所以請新朋友放心學習。
細胞外小泡的研究意義
目前，細胞外小泡的功能尚未完全闡明。據報道，它們可以調節宿主-病原體相互作用，參與感染性和炎性疾病、神經系統疾病和癌癥的病理過程，還在正常生理過程中介導細胞間通訊方面發揮重要作用。據報道，細胞外小泡在發育中也起重要作用。細胞外小泡在臨床醫學上也有著光明的應用前景，主要是因為其含有豐富的生物標誌物，可用於監測臨床狀態、治療反應、疾病進展等。同時，由於它們具有遞送生物分子的功能，因此仍然具有發展成為臨床藥物遞送載體的潛力。
細胞外小泡的分類
細胞外泡-國際細胞外泡學會(ISEV)創造的術語。囊泡可根據其生物合成或釋放途徑進行分類:外泌體直徑為30-150nm，起源於胞吞作用，其密度約為1.11。微粒/微泡直接從質膜釋放，直徑約100-1000nm；雕亡小體/濾過泡的直徑約為50nm-2μm，由雕亡產生。腫瘤囊泡直徑約為1-10μm，由腫瘤細胞釋放產生。和各種其他EV子群。由於不同EV亞組的大小和它們包含的生物分子的差異，幾個組已經開始表征EV亞組的組成。最近的論文聲稱，基於壹般的表面蛋白組學分析或個體EV群體的轉錄譜，細胞外囊泡被成功地分類為亞組。目前，不同的細胞外囊泡亞群可以通過各種手段粗略分離，如差速離心、過濾、免疫親和、層析、流式細胞分選、密度梯度離心等。，但是這些方法不能完全純化特定的亞群，並且分離的亞群通常富含其他細胞外囊泡亞群。
細胞外小泡中包含的成分
細胞外囊泡的成分不是隨機的，每個細胞外囊泡都攜帶特定的分子信息。事實上，這些納米大小的細胞外囊泡可以攜帶蛋白質、脂質、核酸和糖等生物活性分子在細胞之間傳遞信號，其包裝的獨特分子組成決定了要傳遞給受體細胞的細胞外信號的類型。有壹個復雜的分類系統來決定哪些分子可以進入細胞外的小泡。
細胞培養上清液的制備
目前有兩種策略制備細胞培養上清液用於提取胞外小泡。細胞在去除細胞外囊泡的胎牛血清(FBS)培養基中培養，細胞(血清饑餓細胞)在不含FBS的培養基中培養。但目前壹些高水平的文章通常采用前壹種方法。另外，也有文章開始關註去除細胞外囊泡的胎牛血清中遊離RNA對實驗結果的影響，但目前還沒有了解。如果需要先保存培養上清液再用於細胞外囊泡分離，則需要提前去除系統中的死細胞和細胞碎片。
細胞外囊泡的保存
l？Rincz等人在不同條件下儲存了來自中性粒細胞的細胞外囊泡，然後分析了這些囊泡的特性。他們發現，盡管細胞外囊泡樣品中的囊泡數量和形狀沒有明顯變化，但即使是儲存在-20或-80攝氏度的細胞外囊泡也明顯增加了磷脂酰絲氨酸的外翻。但是他們也發現源自尿液的細胞外泡沒有這些變化。Kalra等人從大腸癌細胞中分離出胞外小泡，在不同條件下保持壹定時間，然後用PKH67染色，追蹤胞外小泡的攝取。發現這些囊泡仍能被細胞吸收。就目前情況來看，學者們對儲存條件是否影響胞外小泡還沒有達成共識。因此，建議我們盡快分離細胞外囊泡並用於實驗，盡量減少儲存過程。
細胞外小泡的鑒定和實驗要求
根據國際細胞外囊泡協會2014出版的指南手冊(MISEV)，需要通過WB鑒定樣品中是否存在細胞外囊泡的標誌蛋白，通過電鏡觀察樣品中細胞外囊泡的形態特征，分析群體特征(顆粒濃度、直徑分布等。)的細胞外小泡的方法。
今天到此為止。作為生物學研究的壹個新領域，細胞外囊泡領域越來越受到學者和生物公司的關註，出現了越來越多的研究報告。但是，我們也應該清醒地認識到，這方面的研究技術還不完善，對胞外小泡的認識還不足，胞外小泡的研究還處於起步階段，還有很長的路要走。