DNA提取總的原則是:
① 提取過程中防止和抑制細胞中DNase對DNA 降解;
② 保證核酸壹級結構的完整性;
③ 核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;
④ 盡量去除蛋白質、糖、脂等其他大分子的汙染;
⑤ 去除其他核酸分子如RNA的汙染
十六烷基三甲基溴化銨(hexadecyltrimethyl-ammoniumbromide,CTAB)是壹種陽離子去汙劑,能溶解細胞膜,並具有從低離子強度溶液中沈澱核酸與酸性多聚糖的特性,與核酸結合,使核酸便於分離。
β-巰基乙醇、氯仿、異戊醇、無水乙醇、液氮、研缽、10/2/1.5mL離心管、液氮神器、65℃水浴鍋、渦旋振蕩器、65℃ddH 2 O
⒈於液氮中充分研磨新鮮菌絲,轉移至2mL離心管中,加入500μLCPL Buffer 和10μLβ-巰基乙醇,渦旋混勻,裂解樣品;
⒉在65℃水浴鍋孵育15min,在孵育期間取出離心管混勻2次;
⒊加入500μL氯仿:異戊醇(24:1)混合液,渦旋混勻,≥10000g離心5min;
⒋轉移300μL上清液到新的1.5離心管中;
⒌加入150CXD和300μL無水乙醇調節結合條件,渦旋混勻;
⒍轉移上述混合液到HiBind DNA Column 中,10000g離心1min;
⒎加入650μLSPW Wash Buffer,10000g離心1min,棄濾液;
⒏重復步驟7;
⒐空甩2min;
⒑200μLddH 2 O洗脫兩遍。