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mtt實驗原理

噻唑藍,簡稱MTT。細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜 (Formazan)並沈積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸?(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在壹定細胞數範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。

藥物MTT法實驗步驟:

貼壁細胞:

1. 收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度1000- 10000 /孔,每次加入細胞的槍頭貼著96孔的四周,旋轉緩慢加入,加入細胞後可前後左右水平搖晃幾下,以讓細胞鋪板更佳。

2. 5%CO2,37℃孵育,至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上細胞貼壁後即可加藥.壹般5-7個梯度,每孔100ul,壹行12個孔,兩個PBS填充孔,兩個對照孔,兩個空白孔,6個復孔

3. 5%CO2,37℃孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。

4. 每孔加入10ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應,可先離心後棄去培養液,小心用PBS沖2-3遍後,再加入含MTT的培養液。

5. 終止培養,小心吸去孔內培養液。

6. 每孔加入100ul二甲基亞碸,置搖床上低速振蕩10min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。

7. 同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞碸),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞碸)。