Western Blot即蛋白質印跡法(免疫印跡試驗),是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的壹種實驗方法。
它是將電泳分離後的細胞或組織中蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然後用特異性抗體檢測某特定抗原的壹種蛋白質檢測技術,現已廣泛應用於基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非***價鍵形式吸附蛋白質,
且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
Western Blot的應用檢測材料或藥物對某個信號通路上蛋白靶點的影響:
肝癌是最常見的原發性癌癥之壹,仍是全球第六大癌癥相關死亡原因。多靶點藥物,如索拉非尼(SOR),是肝癌治療的主要抑制劑;然而較差的水溶性、缺乏選擇性和明顯的耐藥性,使其應用受到限制。
上海理工大學李鈺皓副教授研究團隊用鉍基介孔納米材料(NBOF)負載SOR,然後用聚乙二醇和葉酸偶聯物(P-FA)包覆,形成了NBOF@SOR-P-FA納米載體體系。該系統通過將化療和放射治療相結合,實現了顯著增強的抗癌效果。