什麽是核酸分子雜交

在腫瘤學研究中，為了檢測待檢基因或其表達產物的性質和數量，常需應用核酸分子雜交技術。核酸分子雜交技術壹般可分成兩種，壹種是窄縫雜交，另壹種是印跡轉移雜交。窄縫雜交由於加樣最準確性及特導性較差，現在已很少應用。印跡轉移雜交也分成兩種，壹種是Southern blot雜交，用於檢測DNA樣品；另壹種是Northern blot雜交，用於檢測RNA樣品。簡單介紹壹下這些技術的原理，註意事項及應用。

（1）Southern blot雜交 將壹定量的DNA樣品用適當的限制性內切酶切割成不同長度的DNA片段，然後在瓊脂糖凝膠上進行電泳分離，如加樣量相等，酶解適當，則在用溴化乙錠染色時，應顯示長度及亮度均相等的DNA拖帶。電泳後的凝膠須經堿變性處理，使DNA解離成單鏈，然後用毛細管虹吸法或電轉移法，使凝膠上的單鏈DNA片段，按凝膠上相同的位置轉移到硝酸纖維素膜或尼龍膜，經適當洗滌、涼幹後，在80℃烤箱中加溫2小時，即可用於雜交。用於檢測DNA的已知探針，壹般由帶有該片段的細菌質粒中制備。純化的探針DNA壹般用放射性同位素32P或生物素、地高辛配基等標記。雜交前探針必須加溫至100℃變性處理。雜交後的膜在暗盒中進行放射自顯影後，即在壹定的位置顯示同標記探針特異地結合的陽性DNA條帶。Southern blot雜交法可檢測癌基因的存在及其擴增，也可檢測抑癌基因的雜合性丟失。

（2）Northern blot雜交 Northern blot雜交的原理與Southern blot雜交基本相同。所不同處在於，RNA遠不如DNA穩定，很容易被RNA酶降解，而RNA酶不僅廣泛存在，而且加熱至100℃也不能使其滅活，所以在操作RNA時所用的壹切器皿和溶液都必需經過嚴格的消除RNA酶的處理。另外，RNA的電泳必須在含甲醛或乙二醛的變性凝膠中進行。Northern blot雜交主要應用於檢測癌基因或基他腫瘤相關基因的過度表達，也可檢測抑癌基因的低表達或不表達。