壹、細菌的分離鑒定
1、標本:腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等,腹瀉者取糞便。
2、分離培養與鑒定:糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液需先經肉湯增菌,再轉種血瓊脂平板。其他標本可同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。
37℃孵育18~24小時後,觀察菌落並塗片染色鏡檢。采用壹系列生化反應進行鑒定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要時檢定腸黴毒素。
泌尿系統除確定大腸桿菌外,還應計數,每毫升尿含菌量≥100,000時,才有診斷價值。
二、衛生細菌學檢查
大腸桿菌不斷隨糞便排出體外,汙染周圍環境和水源、食品等。取樣檢查時,樣品中大腸桿菌越多,表示樣品被糞便汙染越嚴重,也表明樣品中存在腸道致病菌的可能性越大。故應對飲水、食品、飲料進行衛生細菌學檢查。
1、細菌總數:檢測每毫升或每克樣品中所含細菌數,采用傾註培養計算。中國規定的衛生標準是每毫升飲水中細菌總數不得超過100個。
2、大腸菌數指數:指每立升中大腸菌群數,采用乳糖發酵法檢測。中國的衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群;瓶裝汽水、果汁等每100ml大腸菌群不得超過5個。
三、全自動微生物定量分析儀(TEMPO)檢測
全自動微生物定量分析(TEMPO)儀的大腸桿菌群計數檢測有TC和CC兩種方法。TEMPOTC的開發是為了獲得NFISO4832標準相當性能水平。
TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群的方法。該法是為了獲得和AOAC官方方法966.24及美國公***健康聯合會檢測乳制品檢測方發(SMEDP)壹致的效果。TEMPO系統根據陽性空的大小和數目來推算出原始樣本中大腸桿菌群數目。
擴展資料:
多管發酵法是壹種檢測水體中大腸桿菌的傳統方法,這種方法是在44.5℃的含有熒光底物的培養基上連續培養24h,而後能產生分解熒光底物——葡萄糖醛酸酶,從而釋放出熒光產物,進而使培養基在紫外光照射下產生特征熒光。
此方法可被用來對原樣品中的菌落數作統計學估計。
壹般涉及以下試驗:首先是發酵,在單料或雙料乳糖膽鹽發酵管內發酵;然後是分離培養試驗,利用伊紅美藍培養皿分離;接著是在乳糖發酵管中進行二次發酵,最後通過芽孢染色、革蘭氏染色、顯微鏡觀察等來完成。
多管發酵法對試驗條件要求不高,成本低,但是檢測時間較長,容易受其他條件幹擾,進而影響到測定結果的精確度。
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