壹：殺死細胞，是染料易於著色。
二：使細菌附著於玻片上，不易被水沖掉。
在固定時，是要慢慢晾幹，如果得確要加快速度，可以處於酒精燈火焰上部遠處稍微烘幾下，切忌烘得玻片升溫，否則有可能會破壞細菌生命形態
細菌的革蘭氏染色與顯微觀察
壹、 實驗原理
革蘭氏染色原理：細菌對於革蘭氏染色的不同反應，是由於它們細胞壁的成分和結構不同造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚糖形成的網狀結，當用乙醇處理時，由於脫水而引發網狀結構的孔徑變小，通透性降低，從而使結晶紫-碘的復合物不易被洗脫而保留在細胞內，經脫色和復染後仍保留初染劑的藍紫色。革蘭氏陰性菌的細胞壁肽聚糖層較薄、類脂含量高，所以當脫色處理時，類脂質被乙醇(或丙酮)溶解，細胞壁透性增大，使結晶紫-碘的復合物比較容易被洗脫出來，用復染劑復染後，細胞被染上復染劑的紅色。 顯微鏡成像原理：現代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統來放大成像，故又常 被稱為復式顯微鏡。顯微鏡的光學系統中，物鏡的性能最為關鍵，油鏡的放大倍數最大，對微生物學研究最為重要。在載玻片與鏡頭之間加滴鏡油主要是為了增加照明亮度和增加顯微鏡的分辨率。以油代替空氣作為光的傳播介質，減少光線的折射或全反射，使觀察到的像更加清晰。
二、 實驗器材
1. 菌落：
大腸桿菌24h營養瓊脂斜面培養物、
金黃色葡萄球菌約24h營養瓊脂斜面培養物、 枯草芽孢桿菌12～18h營養瓊脂斜面培養物。
2. 溶液或試劑：
蒸餾水、碘液、結晶紫染色液、95%酒精、番紅染色液、香柏油。 3. 儀器：
顯微鏡、載玻片、接種環、酒精燈、鑷子、擦鏡紙。
三、 實驗步驟
革蘭氏染色：
1. 塗片
取出載玻片，點燃載玻片，燃盡載玻片上的酒精和滅菌，在中間輕輕點壹小滴蒸餾水，用接種環在試管的斜面培養基上，輕輕挑取少量菌體，整個過程試管口都要處在酒精燈的上方，而且速度要快，以防汙染培養基。然後在載玻片的小水滴以轉圈的動作塗片，待水滴混濁後停住，等其幹燥、固定。
2. 初染
滴加結晶紫(以剛好將菌膜覆蓋為宜)於菌落上，染色1～2min ，傾去染色液，有細水從載玻片上方向下沖洗，至洗出液為無色，將載玻片上水甩凈。
3. 媒染
滴加碘液沖去殘水，並覆蓋約1min，水洗。
4. 脫色
將載玻片上面的水甩凈，將載玻片傾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脫色，直至流出的酒精剛好不出現藍色，立即用水沖凈酒精，將載玻片上水甩凈。
5. 復染
用番紅液復染約1～2min，水洗，然後再吸水紙吸幹
6. 鏡檢：
在低倍鏡下尋找要觀察的細菌菌落（在不停地移動載玻片，若感覺到有紅色陰影，立刻停止，調整倍數，若不是菌落，繼續找），將鏡筒升高，然後轉換到油鏡。在樣品區域加滴香柏油，用粗調節器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在鏡油中並幾乎與標本相接。將聚光器升至最高位置並開足光圈，用粗調節器將鏡筒徐徐上升，直至視野中出現物像並用細調節器使其清晰準焦為止。