古詩詞大全網 - 成語故事 - 傳代細胞的培養步驟

傳代細胞的培養步驟

1、附著型胞(adherentcell)

(1)吸掉舊培養液。

(2)用D-PBS洗滌細胞壹至二次。

(3)加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用數分鐘,於倒立顯微鏡下觀察,當細胞將要分離而呈現圓粒狀時,吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA,則在trypsin-EDTA作用後,加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin作用,離心後再吸掉上清液。

(4)輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量之新鮮培養基,以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊,混和均勻後,依稀釋比例轉移至新的培養瓶中,以正常培養條件培養。

2、懸浮型細胞(suspensioncell)

(1)吸出細胞培養液,放入離心管中,離心1000rpm5分鐘。

(2)吸掉上清液,加入適量之新鮮培養基,混和均勻後,依稀釋比例轉移至新的培養瓶中,以正常培養條件培養。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培養三天以上才會產生抗體,若是更換培養基,則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心後更換培養基,直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大,可傾斜放置,或分殖至新培養瓶中。

擴展資料:

傳代方法:

1、懸浮生長細胞傳代

多采用離心法傳代。1000轉/分,20-30秒後去上清。沈澱細胞加新培養液後再混勻傳代。亦有直接傳代 法,即懸浮細胞沈澱在瓶壁時,將上清培養液去除1/2-1/3,然後用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代.

2、半懸浮生長細胞傳代(Hela細胞)

此類細胞部分呈現貼壁生長現象,但貼壁不牢,可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來,進行傳代。

3、貼壁生長細胞傳代

采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

百度百科-傳代培養