目的 :通過突變方法提高抗TNFα單鏈抗體pscTNF的親和力.方法 :以pscTNF質粒為模板 ,應用錯配PCR構建突變抗體庫 ,篩選親和力得到改善的變種 ,再以所獲變種為模板 ,用交替延伸PCR技術 ,再次構建突變庫 ,篩選活性得到改良的克隆.以斑點ELISA方法及硫氰酸鹽洗脫ELISA法評估其親和力的改善.結果 :從錯配PCR抗體庫中篩選得到 7個活性有所增強的變種 ,再通過交替延伸PCR使這 7個變種的突變位點交換重組 ,獲得了親和力進壹步提高的克隆.結論 :聯合應用錯配PCR和交替延伸PCR法可提高單鏈抗體親和力.
目的:采用錯配PCR和DNA改組技術制備抗肝癌單鏈抗體.方法:聯合采用錯配PCR和DNA改組技術隨機突變抗肝癌單鏈抗體A4-16重鏈和輕鏈可變區,構建抗肝癌噬菌體抗體次級突變庫,利用噬菌體展示技術從中篩選出高親和力單鏈抗體突變株.結果:抗肝癌噬菌體抗體次級突變庫容為4·5×107,經過3輪富集篩選和ELISA鑒定獲得2株突變株M25、M36,不僅保留原始克隆的特異性,而且相對親和力指數分別為原始克隆的2倍和2·4倍.結論:錯配PCR結合DNA改組技術是提高單鏈抗體親和力的壹種有效的手段.