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三種印跡技術的原理及區別

三種印跡技術的原理及區別:印記技術是指將在凝膠中別離的生物大分子轉移或直接放在固定化介質上並加以檢測分析的技術。它主要包括 DNA 印跡技術 (Southern blot) 、 RNA 印跡技術 (Northern blot) 和蛋白質印跡技術 (Western blot) 等。

原理:

當模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時會形成多重作用點,通過聚合過程這種作用就會被記憶下來,當模板分子除去後,聚合物中就形成了與模板分子空間構型相匹配的具有多重作用點的空穴,這樣的空穴將對模板分子及其類似物具有選擇識別特性。

區別:

1、DNA印跡技術(Southern blotting)

基因組經限制性內切酶消化後,進行凝膠電泳,將含有DNA片斷的凝膠放入變性溶液變性後,將硝酸纖維膜(NC)膜放在膠上,上面放吸水紙巾,利用毛吸作用使膠DNA轉移質NC膜上,然後利用雜交技術檢測NC膜上的DNA片斷。

2、RNA印跡技術(Northern blotting)

操作方法與Southern blotting相似,但不需要限制性內切酶切割。

3、蛋白質的印跡分析(Western blotting)

與Southern或 Northern雜交方法類似,但Western采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色"用標記的二抗,該檢測技術往往需要抗體。

三種印跡技術的特點:

1、預定性,即它可以根據不同的目的制備不同的MIPs,以滿足各種不同的需要。

2、識別性,即MIPS是按照模板分子定做的,可專壹地識別印跡分子。

3、實用性,即它可以與天然的生物分子識別系統如酶與底物、抗原與抗體、受體與激素相比擬,但由於它是由化學合成的方法制備的,因此又有天然分子識別系統所不具備的抗惡劣環境的能力,從而表現出高度的穩定性和長的使用壽命。