DNA的鑒定
(1)配制二苯胺試劑:取0.1 mL B液;滴入到10 mL A液中,混勻.
(2)鑒定:取4 mL DNA提取液放入試管中,加入4 mL二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍).用沸水浴(100℃)加熱10 min.在加熱過程中,隨時註意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色).
附1:研磨液的配制方法
Tris:10.1 g(相對分子質量為121.4),先加50 mL蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 mol/L的鹽酸調至pH=8.0,再加下述藥品.
NaCl:8.76 g(相對分子質量58.44)
EDTA:37.2 g(相對分子質量372.24)
SDS:20 g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定溶至1000 mL.
若在室溫低於20℃時配制藥液,SDS呈沈澱析出,此時需要加溫,才能將SDS溶解.如果提前配制的研磨液出現了沈澱,則應加溫使沈澱溶解後再使用.
附2:研磨液中幾種藥品的作用
SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與DNA分離.
EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後DNA酶降解DNA.
物質的量濃度為0.15 mol/L的氯化鈉溶液:能很好地溶解DNA.
Tris/HCl:提供緩沖體系,DNA在這個緩沖體系中呈穩定狀態.(Tris為三羥甲基氨基甲烷)
RNA的鑒定
取RNA沈澱約O.2 g，加2 ml 10％H2SO4→沸水浴中加熱2 min→加1.5 ml地衣酚試劑→沸水浴中加熱→觀察顏色變化。