菌種純化與復壯問題。

真菌（以酵母為例）當然也存在復壯問題。壹株酵母菌在多次繁殖後，會產生老化現象。需要復壯。老化現象壹般表現是對數生長期不明顯，曲線過於平緩；菌密度下降明顯；穩定期短；產物產生量下降等。

酵母菌的復壯其實也是分離純化培養，只是要把遺傳性狀穩定、生長良好的菌挑選出來。壹般不用秋水仙素等，因為這類物質很容易造成菌種不可逆變異，導致菌種無法繼續使用。

復壯的步驟壹般是這樣的。

將菌種在全營養培養基中液體培養，進入對數生長期後（時間不要太長，否則會繁殖過度），做較大批量的稀釋平板。觀察菌落生長情況，挑選生長優勢菌落（長得快、長得大），檢測其某方面的生理功能，如發酵力、產酸、產酶等。此過程重復進行，綜合考慮生長優勢與生理功能優勢，直到得到生長強壯、生理功能滿意的菌株。

壹般壹次復壯會多挑選幾支進行對比選擇，也會多留下幾支，以備不時之需。