抗原免疫動物制備血清,常用動物有哪些
以抗原免疫動物獲得抗血清是制備抗體的經典方法。為了提高免疫效果,在免疫的時候,常輔以佐劑以改變抗原的物理狀態而延長其在體內的滯留時間,使抗原緩慢釋放,同時非特異性的促進局部吞噬細胞反應來增強動物的免疫效果。佐劑的類型較多,目前常用的還是福氏佐劑(Freund’sAdjuvant,FA)。它是壹種對大多數抗原都有效的佐劑,但由於它的壹些副作用限制了它在實驗動物上的使用。因此,福氏佐劑只能在確實需要的情況下(如使用的抗原為小分子可溶性抗原或半抗原)和強佐劑活性時使用。FA是用礦物油(石蠟油)、乳化劑(羊毛脂)和滅活的分枝桿菌(結核分枝桿菌或卡介苗)組成的油包水乳化佐劑。這三種成分俱全的佐劑稱為福氏完全佐劑(Freund’sComDeleAdjuvant,FCA),不含分枝桿菌的佐劑為福氏不完全佐劑(Freund’sInconrpleteAdjuvant,FIA)。石蠟油因不能代謝而存留在註射的部位,這就阻礙了抗原降解或快速反應,起到抗原儲存作用,使抗原緩慢持續的釋放,不斷刺激機體的免疫系統而產生免疫反應。乳化劑對於水溶性抗原與油穩定地乳化是必要的。分枝桿菌具有很強的免疫刺激作用,可以非特異性的激活免疫系統。FCA用於基礎註射,而FIA用於輔助註射以避免分枝桿菌蛋白引起的過敏反應。FA皮下註射或肌內註射可導致多種副作用,例如肉芽腫和無菌性膿腫的形成。腹腔註射引起腹膜炎。由於這些嚴重的副作用,FA不允許用於人或動物的疫苗接種免疫。傳統的免疫方案,包括使用福氏佐劑和某些免疫程序,已不再被壹些國家的權威機構所接受。據調查,在荷蘭有64%的研究人員使用FCA,而且,用於多克隆抗體的生產方案差異很大。因此,在1993年,荷蘭發布了利用動物免疫技術制備多克隆抗體的生產指南。主要規定了加強免疫註射的次數、免疫途徑、註射量和佐劑的使用,並且支持使用替代佐劑來替換FCA。由於FCA給實驗動物帶來的嚴重的副反應,對它的使用提出了特別的限制,規定了(小鼠和大鼠sc:0.1nd;i.d:家兔0.o5rI1l;i.P:小鼠0.2nd)推薦使用量和註射途徑。