由於溫度對酶反應有影響，所以測定時樣品和試劑均需達到室溫後再進行測定。
為保證熒光素酶檢測試劑的穩定性，可以采取適當分裝後避光保存的方法，以避免反復凍融和長時間暴露於室溫。壹般來說，如果不分裝使用三次(期間凍融三次)，對測定結果無明顯影響。
樣品和測定試劑混合後，必須等待1-2秒，再進行測定。測定時間通常為10秒，根據情況也可以測定更長或更短時間，但是同壹批樣品最好使用相同的測定時間。
為避免由於質粒轉細胞時效率的差異而帶來的誤差，可以同時轉入Renilla熒光素酶的報告基因質粒作為內參，采用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒進行檢測;也可以同時轉入β-半乳糖甘酶報告基因質粒作為內參，然後采用β-半乳糖苷酶報告基因檢測試劑盒進行檢測。采用熒光素酶報告基因檢測試劑盒中的報告基因細胞裂解液裂解獲得的樣品，可以直接用於β-半乳糖苷酶報告基因檢測試劑盒中的測定。
影響熒光酶活性的因素很多，溫度，PH值，培養基裏的酚紅含量，註意熒光素必須要避光保存，否則發光減弱。
為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴壹次性手套操作