高效液相色譜法英文縮寫是:HPLC。
高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的壹個重要分支,以液體為流動相。
高效液相色譜分析原理:
(壹)高效液相色譜分析的流程:由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統,然後輸出,經流量與壓力測量之後,導入進樣器。被測物由進樣器註入,並隨流動相通過色譜柱,在柱上進行分離後進入檢測器,檢測信號由數據處理設備采集與處理,並記錄色譜圖。
廢液流入廢液瓶。遇到復雜的混合物分離(極性範圍比較寬)還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似,不同的是氣相色譜改變溫度,而HPLC改變的是流動相極性,使樣品各組分在最佳條件下得以分離。
(二)高效液相色譜的分離過程:同其他色譜過程壹樣,HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的壹種連續多次交換過程。它借溶質在兩相間分配系數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。
開始樣品加在柱頭上,假設樣品中含有3個組分,A、B和C,隨流動相壹起進入色譜柱,開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數小的組分A不易被固定相阻留,較早地流出色譜柱。分配系數大的組分C在固定相上滯留時間長,較晚流出色譜柱。
組分B的分配系數介於A,C之間,第二個流出色譜柱。若壹個含有多個組分的混合物進入系統,則混合物中各組分按其在兩相間分配系數的不同先後流出色譜柱,達到分離之目的。